Nerokas mutta hullu erakoitunut tohtori Mabuse on hoidettavana mielisairaalassa. Ulkomaailmassa on käynnissä tarkkaan laskelmoitu hienostuneiden rikosten sarja, josta poliisi on aivan ymmällään. Sairaalassa Mabuse pitää muita potilaita pihdeissään. Hypnotismin ja loistavan manipuloinnin avulla hän hallitsee alamaailmaa, vaikka hänellä ei näytä olevan mitään yhteyttä siihen.
Tri Mabusen testamentti kiellettiin Kolmannessa valtakunnassa, ja siitä tuli juutalaisen Fritz Langin viimeinen elokuva ennen kuin hän pakeni maasta, sen jälkeen kun propagandaministeri Joseph Goebbels yritti palkata hänet natsien hoviohjaajaksi.